第204章 医学泰斗
孙长明就像个路过的NPC，丢下几句毫无杀伤力的台词後就自己退场了。
关於无能的丈夫这一块————
陈浩还要说：「好像看见孙教授关门的时候捂着胸口，不会有事吧？」
易向晚：「没事，应当是受了点内伤，回去休养几天就好了，咱们继续工作吧。
7
陈浩和易向晚，人走了还要补刀！
而且刚才正是陈浩一脸无辜地提出字字诛心的问题。
这个陈浩，怎麽这麽坏啊！
重新开始实验。
NanoDrop上几组数据都很完美。
王晓晴乖巧请教：「江河，接下来怎麽做？」
目前浓度和纯度虽然达标了，但miRNA片段太短。
传统的逆转录实验，一般都是用oligo（dT）引物去抓mRNA尾巴上的Poly—A结构。
可是miRNA根本没有这种长尾巴，常规的逆转录引物根本抓不住它。
这在08年又是一个技术难题。
全世界的实验室都在寻找一种高效特异的办法，把这短短二十几个硷基的片段给稳定地逆转录出来。
江河道：「之前讲过茎环引物，当然，後入组的组员来得晚不知道，陈浩，你给大家简单讲讲。」
「ok啊。」
陈浩道：「这个引物分为两部分，後面是一个能够自我互补打折形成的茎环结构，它的作用是提供空间位阻，增加稳定性；前面伸出来一小段，大概6到8个硷基，这段序列和我们要抓的特异性miRNA的3端完全互补。」
王晓晴点点头：「明白了，引物前端这几个硷基先跟miRNA的尾巴精准结合，然後逆转录酶就可以用这个双链结构作为起始点，一路把miRNA的互补链给合成出来。」
杨煦很想插嘴装逼。
可这一段江河还没教他。
他也不会啊。
只能悻悻放弃。
陈浩则感觉很爽。
—没想到吧！自己也有给教授上课的一天！
他笑了笑，接着说：「不仅如此，茎环结构在室温下是摺叠闭合的，只有在结合了目标miRNA後才会打开，这会极大降低引物结合到其他杂质RNA上的概率，特异性会呈指数级上升。」
陆晓林补充：「对了，引物序列老大已经设计好了，今天早上刚送到。」
他拉开旁边的一个抽屉，拿出一排装在冰盒里的离心管。
江河看了眼，点点头道：「现在配置逆转录体系，16度30分钟让引物结合，42度30分钟逆转录，最後85度5分钟灭活酶。」
「收到！」
一个多小时後。
逆转录程序跑完，酶被灭活。
接下来是最紧张的验证环节。
上机，跑gPCR（实时萤光定量PCR）。
众人屏息凝神，迅速配好萤光定量体系，将满载着希望的八排管放进了旁边那台ABI7
500定量PCR仪中。
显示器。
第18个循环。
萤光信号突然爆发，拉出了一道完美平滑的扩增曲线！
一个多小时後，40个扩增循环全部结束，机器进入最後的升温阶段。
紧接着跑出来的熔解曲线，呈现出极为漂亮的单一峰型！
这意味着，江河团队极其精准地抓住了miRNA，并成功将其逆转录！
实验室里爆发出一阵欢呼。
其实项目推进到这里，就已经可以向外发论文了，光是这一步，都是非常了不起的一步！
江河脑海中的进度条再次往上狼涨干个百分点。
【miRNA胰腺癌早筛项目进度：45%————】
技术难点突破。
进度稳步推进。
江河很满意，道：「行了，体系跑通了，剩下的就是重复验证，大家先停手，休息二十分钟。」
众人纷纷休息，庆贺，揉肩膀的揉肩膀，喝水的喝水。
易向晚讲起了自己珍藏的矮人笑话，顾亦舟表示懒得管。
周洋和林月找了个角度复盘。
因为他们两个是本科大三，而且才进组，基础薄弱。
前面很多操作环节他们根本插不上手，只能在旁边打杂记录。
这会儿闲下来了，周洋拿了个废弃的枪头盒当教具，一边比划一边小声给林月复盘：「你看啊，老大刚才说的那个茎环，我个人理解嗷，就像这个盒子的盖子，平时它是关着的，等碰到了那个短的miRNA，咔哒一下，它就咬住了，然後酶就顺着跑过去————」
林月像小鸡啄米一样：「确实，确实。」
周洋：「不对不对，这个举例不好，我换个说法————」
林月继续点头：「确实。」
江河叹了口气。
果然，当初就不该让这两个人一起进组。
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